1. dna抽提及檢測實驗報告
可利用分子大小不同,堿基組成的差異以及質(zhì)粒DNA的超螺旋共價閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的特點來進行。
堿基性法抽提效果良好,,既經(jīng)濟且得率較高。抽提到的質(zhì)量DNA可用于酶切,、連接和轉(zhuǎn)化。
對于分子量較大拷貝較少對的質(zhì)粒DNA,,由于DNA片段較大易于損傷斷裂,,因此選用呂華銫密度超高離心法抽提DNA,且具有純度高,、步驟少,、方法穩(wěn)定且獲得的質(zhì)量DNA是超螺旋構(gòu)型等特點。
對于高拷貝數(shù)質(zhì)粒,,用少量制備法抽提質(zhì)粒DNA就有足夠量可用于基因操作,。
2. dna抽提試劑
提取儀是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸提取工作的儀器,廣泛應用在疾病控制中心,、臨床疾病診斷,、輸血安全、法醫(yī)學鑒定,、環(huán)境微生物檢測,、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學研究等多種領域,。PCR儀一般指基因擴增儀,,要用于用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增,、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增,、基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增等。
PCR儀用于科研及臨床的基因擴增,,定性PCR基因擴增,,熒光/酶免終點定量DNA基因擴增,基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增,,適合國內(nèi)外各種PCR試劑盒傳染病類(各型肝炎病毒,、結(jié)核桿菌,、STD性傳播疾病,、優(yōu)生優(yōu)育、支原體、衣原體,、寄生蟲等),、腫瘤類(P53、幽門螺桿菌等),、科研類(遺傳鑒定,、細菌病毒分型等)。
3. dna抽提液的作用
主要成分是:NaCl,Tris-HCl(PH=8),EDTA(PH=8),SDS.NaCl,Tris-HCl主要是調(diào)節(jié)溶液的PH,維持一定的離子濃度.EDTA主要是二價金屬離子的螯合劑,使影響DNA的DNA酶中的鈣離子和鎂離子和EDTA結(jié)合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA,;SDS主要是和蛋白質(zhì)結(jié)合,使其變形沉淀,從而利于DNA的提取,減少和清除帶白質(zhì)雜質(zhì)!
4. dna抽提的原理
強堿性條件下,,質(zhì)粒DNA和基因組DNA同時從細胞中釋放出來,并發(fā)生變性,。
在pH中性,,并有高鹽濃度存在的條件下,質(zhì)粒DNA會迅速發(fā)生復性,,仍為可溶性狀態(tài),,染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),在去垢劑SDS作用下,,染色體DNA與變性蛋白質(zhì)和細胞碎片結(jié)合形成沉淀,,通過離心去除沉淀后,再用酚氯仿抽提進一步純化質(zhì)粒DNA,,用異丙醇或乙醇沉淀可將之純化出來,。
5. 試劑盒抽提dna的基本原理
原理就是去掉植物細胞壁
細胞膜
質(zhì)體
線粒體
葉綠體
剩下細胞核了。就是DNA了,。
通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞,,由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產(chǎn)生不利的影響,在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性,。在液氮中研磨,,材料易于破碎,并減少研磨過程中各種酶類的作用,。
十二烷基肌酸鈉(sarkosyl),、十六烷基三甲基溴化銨(hexadyltrimethyl
ammomum
bromide,簡稱為CTAB),、十二烷基硫酸鈉(sodium
dodecyl
sulfate,,簡稱SDS)等離子型表面活性劑,能溶解細胞膜和核膜蛋白,,使核蛋白解聚,,從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑,,能使蛋白質(zhì)變性,,并使抽提液分相,,因核酸(DNA、RNA)水溶性很強,,經(jīng)離心后即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質(zhì),。上清液中加入無水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,,即得植物總DNA溶液
6. dna提取實驗分析及討論
孵育一般指的就是靜置,,經(jīng)常會見到,多少度孵育多少時間,,這就是指在特定溫度下,,將混合的樣品靜置,這就叫做孵育,。
7. dna抽提過程中應注意什么問題
CTAB (Cetyl trimethyl ammonium bromide)法是一種常用的植物組織或真菌等含有多種多酚類物質(zhì)的樣品提取基因組DNA的方法,。下面是CTAB法提取DNA的詳細步驟:
1. 樣品制備:取適量樣品(如葉片、莖稈等),,快速清洗去除表面雜質(zhì),,并迅速切碎至0.5cm左右大小。
2. 組織破碎:將組織樣品加入研缽中,,加入冰冷的CTAB緩沖液(含0.7M NaCl, 100mM Tris-HCl(pH8.0),,20mM EDTA(pH8.0),1% CTAB(w/v)),,按照比例為1:3~4(組織樣品:CTAB緩沖液)混合,,用液氮或攪拌器將其研磨成均勻漿狀物。
3. 組織裂解:將裂解后的樣品轉(zhuǎn)移至離心管中,,加入等體積的氯仿和異戊醇,,輕輕搖勻離心管,使液體混合均勻,,然后靜置樣品,,待上層水相變得透明,下層蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)沉淀于離心管底部,。
4. DNA提?。簩⑸锨逡何觯尤肜涞?5%乙醇,,輕輕攪拌使其充分沉淀DNA,,然后離心10~15min,去除上清,,用70%乙醇洗滌一遍,,再次離心去除上清,將干燥的DNA沉淀中加入去離子水或TE緩沖液中溶解即可,。
5. 檢測DNA品質(zhì):將提取的DNA樣品用紫外線分光光度計進行檢測,,根據(jù)A260/A280比值評估DNA純化程度和可能存在的其他污染物,。
注意事項:
1. CTAB緩沖液中CTAB的濃度應控制在1%(w/v)以下,高濃度會影響DNA的純化效果,。
2. 樣品細胞量應在10mg以上,過少會影響DNA提取量,。
3. 在操作中要盡可能避免嵌合等細菌或真菌在樣品中的污染,。
4. 在操作過程中要嚴格遵守無菌技術操作規(guī)范,以避免污染,、降低提取DNA的純度和完整性,。
8. 抽dna步驟
DNA的提取方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,,消化蛋白,,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右,。
三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪于乙醇上,,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb,。
四.異丙醇沉淀法:基本同1法,,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
五.表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,,乙醇沉淀或透析。
六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,,五分鐘,,然后離心后取上清,可用于PCR反應,。
七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,,再加HCI中和,離心后取上清,,含少量DNA,。
9. dna的提取和檢測實驗
DNA提取是從細胞中分離和純化DNA的過程。下面是一種常見的基本方法,。
實驗步驟:
1. 從含有DNA的樣本(比如血液,、細菌、植物等)中采集細胞并將其釋放到一個離心管中,。
2. 加入細胞裂解液,,用來破壞細胞壁和細胞膜,,釋放出細胞內(nèi)的DNA。
3. 加入蛋白酶,,將細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)降解掉,。通常使用絲氨酸蛋白酶或蛋白酶K。
4. 加入鹽,,使得DNA與其他細胞成分分離,。鹽可以使DNA形成一個粘稠的團塊,從而方便分離和純化,。
5. 加入冷酒精,,使得DNA在酒精中沉淀并凝聚成片。通常使用70%的乙醇或異丙醇,。
6. 使用微量孔徑濾器或離心機進行分離和純化,,去除其它雜質(zhì),使DNA得以分離和純化,。
注意事項:
1. 在實驗中使用的工具和材料要徹底消毒,,以避免細菌和其他污染物的干擾。
2. 在實驗過程中要保持樣品溫度低,,以防止DNA分解,。
3. 在實驗過程中,不能使用過多的酒精或其他重質(zhì)組分,,否則DNA可能會被破壞,。